8.20

From CSBLwiki

pB4가 pJL보다 발현 protein의 solubility를 높여준다.

DpN1 : TEMP과 VECTOR의 항생제저항성이 같을 때만 사용한다. 항생제저항성이 다르면 쓸 필요 없다

PCR

NACREIN,DR,CA,R + yfaL

효소 두개사용 - a-Taq이랑 Q5(a-Taq보다 정확도가 높다)

10x buffer 5

HQ 5

Temp 1

Primer 2

dNTP 3.5

a-Taq 0.5

DW 34

5x buffer 10

Enhancer 10

Temp 1

Primer 0.5

dNTP 3.5

Q5 0.5

DW 22.5

gel prep & enzyme cut

pSBIC3 vector 42 Buffer#4 5 BSA 1 Spe1 1 EcoR1 1

37'c 2h

tranformation

BL21(DE3) - pB4-N1,N2,N3,CA,DR (N1,N2는 한자리 mutation, N3는 frameshift)

insert랑 vector 다 clean up 하고

mix, ligation 후

DH5a와 BL21(DE3)에 transformation