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EtBr을 녹인 액체한천을 전기영동 틀애 붓고 comb을 이용해서 14개의 wall을 만든다. 그 위에 젤이 잠기도록 버퍼를 붓는다. ×5 loading dye (loading buffer)를 원래는 dye 1 : DNA 4 로 혼합하지만 보통 dye 1 : DNA 2로 혼합한다. 피펫팅으로 혼합시킨 후 각 wall에 주입하고 1번 wall에 마커를 2만큼 넣는다. 그리고 100V에 30min으로 전압을 걸어준다. 30분 후 젤을 꺼내어 자외선램프에서 결과를 확인한다.

단위 : 마이크로리터

cf) loading buffer 성분 조사

1. 분자량이 큰 sucrose, ficoll, glycerol이 DNA에 무게감을 줘서 전기영동동안 뜨지않고 가라앉게 해준다.

2. DNA와 섞여서 loading되는 dye 성분으로 BPB(bromophenol blue)와 XC(xylene cyanol)이 있다. 이들은 charge가 있어서 전기영동 중에 DNA보다 빨리 내려가 대강 로딩정도를 확인할 수 있게한다.

Gel-loading buffer(type 4) 만들기

50ml : 0.25% bromophenol blue 0.125g, 40% (w/v) sucrose(in H2O) 20g

TAE 만들기

50* STOCK solution (1L)

-242g of Tris base

-57.1ml of glacial acetic acid

-100ml of 0.5M EDTA(pH 8.0)