TSS solution

LB : 영양분

Polyethylene glycol : 고분자물질이 있으면 transformation이 잘 일어난다.

DMSO : 완충제, 안정제

MgCl2 : Mg2+ 이가 양이온이 세포막에 구멍을 내는 역할을 한다. 막을 흐물흐물하게 만들어준다.

transformation

1. -80°C에서 얼렸던 competent cell을 ice에 넣고 녹인다. ice cold competent cell 50마이크로L와 8.8ng/마이크로L짜리 PUC19 플라스미드 DNA 1마이크로L를 섞는다.

2. ice에서 20분 동안 incubate한다.

3. DNA microheater로 42°C에서 1분간 heat shock

4. Heat shock 후 ice에 2분간 넣어둔다.

5. 37°C pre-warmed LB broth 200마이크로L를 첨가한다.

6. 37°C, 200rpm에서 60분 배양한다.

7. 총 250마이크로L중에서 50마이크로L만 pre-warmed LBA plate에 beads로 spread하고 37°C에서 하루동안 배양한다.(PUC19는 암피실린 저항성을 가졌기 때문에) 나중에 클로니 수에 5배를 해준다.

cf) bead 도말 : beads를 plate의 반 정도 넣고 흔들어주다가 beads가 마르면 버린다./하키바로 도말할 수도 있다.

cf) transformation 효율 : colony/DNA 1마이크로g, 보통 1×10^6, 이 셀을 써도 되는지 아닌지 평가하는 기준이 된다.