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준비물 : TSS solution 50ml(85% LB 1.0625g, 10% Polyethylene glycol 5g, 5% DMSO 2.5ml, 50mM MgCl2 anhydrous 0.228g), 2×LB medium 200ml (LB 6.2g, NaCl anhydrous 3.8g)

1. 저번에 LB plate에 도말하고 37°C에서 하루 배양한 E.coli

2. 의 싱글 콜로니를 팁으로 채퓌하여 그대로 4ml LB broth를 넣룬 튜브 안에 넣는다. 이 튜브를 37°C, 200rpm에서 하루 배열한다.

3. 5ml LB broth에서 하루배양한 것의 2ml를 추출해서 만들어놓은 2×LB medium 200ml에 넣어 OD600이 0.6~0.8 될 때까지 37°C 200rpm에서 배양한다.

cf) OD600(optical density)은 600nm에서의 흡광도로, 탁한정도를 나타내며 이는 미생물의 농도와 관련있다. 0.6~0.8이 되기엔 대략 3시간 정도가 필요하다.

4. OD600이 0.8에 도달하면 ice에 20분간 냉각한다.(우리실험실 기기로는 0.3에 도달해도 된다고 간주함) 냉각 후 1500rpm, 4°C에서 5분 원심분리한다.

5. 원심분리한 cell를 ice-colded TSS 4ml에 현탁한다. (현탁 시 최대한 셀에게 물리적인 압력이 없게 살살 한다.)

6.1.5ml짜리 튜브에 330마이크로l만큼씩 넣어서 앳페딜소에 담갓다가 -80°C에 보관한다.

TSS solution

LB : 영양분

Polyethylene glycol : 고분자물질이 있으면 transformation이 잘 일어난다.

DMSO : 완충제, 안정제

MgCl2 : Mg2+ 이가 양이온이 세포막에 구멍을 내는 역할을 한다. 막을 흐물흐물하게 만들어준다.