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| - | 5.원심분리한 cell를 ice-colded TSS 4ml에 현탁한다. (현탁 시 최대한 셀에게 물리적인 압력이 없게 살살 한다.) | + | 5. 원심분리한 cell를 ice-colded TSS 4ml에 현탁한다. (현탁 시 최대한 셀에게 물리적인 압력이 없게 살살 한다.) |
6.1.5ml짜리 튜브에 330마이크로l만큼씩 넣어서 앳페딜소에 담갓다가 -80°C에 보관한다. | 6.1.5ml짜리 튜브에 330마이크로l만큼씩 넣어서 앳페딜소에 담갓다가 -80°C에 보관한다. | ||
Latest revision as of 00:45, 24 January 2013
항생제배지만들기
LBA 100ml : LB 2.5g, agar 1.5g, ×1000 amp 100마이크로L
LBK 100ml : LB 2.5g, agar 1.5g, ×1000 kan 100마이크로L
항생제는 배지가 60°C 이하일때 넣는다.
배지는 만들고 잠시 1,2시간 동안 건조기에 보관 가능하다. 하지만 contamination에 유의
competent cell 만들기
3. 5ml LB broth에서 하루배양한 것의 2ml를 추출해서 만들어놓은 2×LB medium 200ml에 넣어 OD600이 0.6~0.8 될 때까지 37°C 200rpm에서 배양한다.
cf) OD600(optical density)은 600nm에서의 흡광도로, 탁한정도를 나타내며 이는 미생물의 농도와 관련있다. 0.6~0.8이 되기엔 대략 3시간 정도가 필요하다.
4. OD600이 0.8에 도달하면 ice에 20분간 냉각한다.(우리실험실 기기로는 0.3에 도달해도 된다고 간주함) 냉각 후 1500rpm, 4°C에서 5분 원심분리한다.
5. 원심분리한 cell를 ice-colded TSS 4ml에 현탁한다. (현탁 시 최대한 셀에게 물리적인 압력이 없게 살살 한다.)
6.1.5ml짜리 튜브에 330마이크로l만큼씩 넣어서 앳페딜소에 담갓다가 -80°C에 보관한다.
