2.13

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(단백질발현실험)
(단백질발현실험)
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5. cell harvest : large scale - 500ml bottle 두개에 옮겨 담아서 원심분리 후 냉동보관
5. cell harvest : large scale - 500ml bottle 두개에 옮겨 담아서 원심분리 후 냉동보관
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                   small scale - 500 마이크로L 만 따로 떠서 원심분리
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                   '''small scale - 500 마이크로L 만 따로 떠서 원심분리'''
6. cell Lysis : small scale ; lysis 용액인 bugbuster 100 마이크로L 에 현탁 후 30분 상온보관, 원심분리 10분(!)
6. cell Lysis : small scale ; lysis 용액인 bugbuster 100 마이크로L 에 현탁 후 30분 상온보관, 원심분리 10분(!)

Revision as of 05:18, 14 February 2013

Contents

단백질발현실험

5. cell harvest : large scale - 500ml bottle 두개에 옮겨 담아서 원심분리 후 냉동보관

                 small scale - 500 마이크로L 만 따로 떠서 원심분리

6. cell Lysis : small scale ; lysis 용액인 bugbuster 100 마이크로L 에 현탁 후 30분 상온보관, 원심분리 10분(!)

7. protein gel loading : SDS-PAGE ;

-soluble과 insoluble+buffer 100마이크로L 준비

-protein 20 마이크로L + 5*sample buffer 5 마이크로L

-HEAT ; denature 5min at 95`c

-1초 spin down

-marker랑 같이 로딩 ; 로딩.JPG

200V, 50min


-instant blue로 염색

-로딩결과 원하는 단백질로 추정되는 soluble protein이 보임


cf) 원심분리(!) 하는 이유 : 단백질이 제대로 발현됬으면 soluble이기 때문에, 그리고 변성을 막기위해 4`C 쿨링 centrifuge 로

5*sample buffer

Tris-HCl(pH 6.0) : 버퍼

glycerol : 단백질 가라앉히기

SDS : 단백질 2차구조 형성 억제, 음전하 붙여주기

2-merchapto ethanol

bromophenol blue : 진행정도 확인

H20

compt cell 만들기

tss에 현탁 해서 보관함

tss만들기

TAE 만들기

50* STOCK solution (1L)

-242g of Tris base

-57.1ml of glacial acetic acid

-100ml of 0.5M EDTA(pH 8.0)

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